兔黏著斑激酶(FAK)ELISA檢測(cè)試劑盒
兔黏著斑激酶(FAK)ELISA檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品價(jià)格:¥1800(人民幣)
  • 規(guī)格:96T
  • 發(fā)貨地:上海浦東新區(qū)
  • 品牌:
  • 最小起訂量:1盒
  • 免費(fèi)會(huì)員
    會(huì)員級(jí)別:試用會(huì)員
    認(rèn)證類型:企業(yè)認(rèn)證
    企業(yè)證件:通過(guò)認(rèn)證
    認(rèn)證信息:上海蒂莎科技有限公司

    商鋪名稱:上海蒂莎科技有限公司

    聯(lián)系人:李萱(小姐)

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    聯(lián)系地址: 上海市奉賢區(qū)南橋鎮(zhèn)金海公路3265號(hào)18號(hào)樓13245室

    郵編:

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    商品詳情

      本試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本黏著斑激酶FAK)的含量。

      有效期:6個(gè)月

      保存條件:2-8℃

      本試劑盒僅供科研使用,不得用于臨床診斷

      實(shí)驗(yàn)原理

      試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被兔黏著斑激酶(FAK)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的兔黏著斑激酶(FAK)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。

      樣本處理及要求

      1.  血清將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4過(guò)夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
      2.  血漿EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
      3.  組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mLPBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測(cè)。

      4.  細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:請(qǐng)1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

      注:標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測(cè)結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。

      需要而未提供的試劑和器材

      1.  酶標(biāo)儀(450nm

      2.  高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL20-200uL、200-1000uL

      3.  37℃恒溫箱

      4.  蒸餾水或去離子水

      試劑盒組成

       

      名稱

      96孔配置

      48孔配置

      備注

      微孔酶標(biāo)板

      12×8

      12×4

      無(wú)

      標(biāo)準(zhǔn)品

      0.3mL*6

      0.3mL*6

      無(wú)

      樣本稀釋液

      6mL

      3mL

      無(wú)

      檢測(cè)抗體-HRP

      10mL

      5mL

      無(wú)

      20×洗滌緩沖液

      25mL

      15mL

      按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋

      底物A

      6mL

      3mL

      無(wú)

      底物B

      6mL

      3mL

      無(wú)

      終止液

      6mL

      3mL

      無(wú)

      封板膜

      2

      2

      無(wú)

      說(shuō)明書(shū)

      1

      1

      無(wú)

      自封袋

      1個(gè)

      1個(gè)

      無(wú)

      1.  標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為: 20、10、 5、2.5、1.25、0.625 ng/mL

      2.  經(jīng)過(guò)大量正常標(biāo)本檢驗(yàn),標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測(cè)范圍內(nèi),實(shí)驗(yàn)過(guò)程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過(guò)最大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí),可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

      注意事項(xiàng)

      1.  嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

      2.  洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過(guò)程中不要讓微孔干燥掉。

      3.  消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。

      4.  底物顯色液應(yīng)呈無(wú)色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。

      5.  避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。

      6.  在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。

      7.  平衡至室溫后再打開(kāi)密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

      8.  任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。

      9.  不能使用過(guò)期產(chǎn)品。

      10.  如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。

      試劑準(zhǔn)備

      試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。

      20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按120稀釋,即120×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

      操作步驟

      1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃

      2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

      3.  樣本孔待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。

      4.  除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min

      5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

      6.  每孔加入底物A、B50μL,37℃避光孵育15min。

      7.  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

      實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算

      所測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計(jì)算出樣品濃度。

      試劑盒性能

      1.  檢測(cè)范圍0.625 ng/mL – 20 ng/mL。

      2.  靈敏度:最低檢測(cè)濃度小于0.1 ng/mL

      3.  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

      4.  重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% 板間變異系數(shù)小于15% 。

      說(shuō)明

      由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對(duì)所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行全面的鑒定與分析,本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)。

      1.  最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性、實(shí)驗(yàn)者的相關(guān)操作以及當(dāng)時(shí)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān),請(qǐng)務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份。

      2.  不同批次的同一產(chǎn)品可能會(huì)有少許差別,如:檢測(cè)限、靈敏度以及顯色時(shí)間等,請(qǐng)依據(jù)試劑盒內(nèi)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作,網(wǎng)站電子版說(shuō)明書(shū)僅作參考。

      3.  只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測(cè)效果,不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴(yán)格遵守本試劑盒的實(shí)驗(yàn)說(shuō)明才會(huì)得到最佳的檢測(cè)結(jié)果。

      4.  本公司只對(duì)試劑盒本身負(fù)責(zé),不對(duì)因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé),請(qǐng)使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,預(yù)留充足的樣本。

      5.  使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會(huì)由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。

      6.  若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清,因該類樣本干擾因素較多,如:細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時(shí)間等,所以可能存在檢測(cè)不出的情況。

      7.  某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測(cè)抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢測(cè)出。

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